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非病毒、无质粒产生可表达抗CD19的CAR-T细胞
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2022-6-8 19:33:57
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Linearx公司独特的基于PCR的制造技术创造了编码抗CD19接合器的线性DNA扩增子,然后将该DNA构建体在体外通过电穿孔技术递送至人类T细胞。随后的测试证实,这些工程化T细胞实现了抗CD19 CAR的表达。尽管这些初步数据令人鼓舞,但总体表达水平较低,目前Linearx公司正在继续使用正在申请专利的高表达扩增子技术(HEA)和除电穿孔外的转染方法来产生较高的转染水平,并将在之后报告这一重大成果的进一步进展。
质粒生产
应用DNA科学公司总裁兼首席执行官James A.Hayward博士表示,“我们的目标有三个方面:1)确定PCR生产的线性DNA作为一个平台用于快速设计和生产治疗性核酸构建体的价值,包括床旁(POC)应用;2)证明NVPF生产流程改善的安全性和治疗价值,该流程不同于目前全行业基于病毒的生产流程;3)与未来的合作伙伴一起,将我们开发的基于NVPF的抗CD19 CAR-T细胞疗法推进临床。
PCR产生的GFP基因片段在人类T细胞中的表达
这项成果建立在2018年底通过LineaRx公司PCR技术生产、设计、制造的线性DNA扩增子在工程化人类T细胞的第一个实例基础上。该实例首次证明了一种包含可编码绿色荧光蛋白(GFP)完整基因的线性DNA扩增子。如上图所示,通过高通量电穿孔技术,PCR产生的GFP基因片段在数百个人类T细胞中被摄入及随后表达,形成了绿色荧光细胞群。
2018年10月,Linearx公司宣布与Icell Gene Therapeutics签署了一项针对抗CD19 CAR-T疗法的北美独家许可和研究服务协议。结合Applied DNA公司在大规模PCR生产和DNA化学修饰方面的专业知识,该公司将利用其NVPF平台开发和生产表达载体用于多款CAR-T疗法,包括LinCART19,这是一款非病毒、无质粒的抗CD19 CAR-T候选药物。
正如2018年12月Linearrx公司在分析师日所讨论的那样,在中国开展的一项临床试验中,LinCART19所基于的CAR-T基因构建体在单次低剂量治疗后6个月,所有3例急性淋巴细胞白血病(ALL)患者均实现完全缓解。虽然这些有希望的临床结果为所使用的基因构建体提供了价值证据,但CAR-T细胞是通过病毒载体进行转染的。LinCART19将使用线性DNA,并通过电穿孔、增溶或其他方式导入T细胞,其所针对的CD19是几乎所有B细胞恶性肿瘤中表达的细胞表面蛋白,这也是目前已上市的两款CAR-T疗法的靶点。
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